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（1）周围血象测定：包括红细胞、白细胞、血小板计数、血红蛋白和红细胞比容测定。叶酸缺乏时的贫血是大细胞性的（MCV＞100fl），常呈现红细胞形态和大小的改变，可伴有中性粒细胞减少和血小板减少，特别是在叶酸长期缺乏的病例中，中性粒细胞增大部分伴有核分叶过度（核右移），5%以上的中性粒细胞5个分叶或更多的分叶。
（2）骨髓象测定：最显著的变化巨红细胞及大而异常的中性粒细胞，伴有胞质的空泡形成和巨核细胞的核分叶过度。
（3）血清叶酸测定：有微生物和放射竞争性蛋白结合技术两种方法。微生物法测定是根据乳酸杆菌在生长过程中需要N-5甲基四氢叶酸的原理监测乳酸杆菌的生长量；放射竞争性蛋白结合技术测定是根据叶酸对蛋白有较高的亲和力，蛋白特异地结合这些分子。
（4）红细胞叶酸测定：测定红细胞溶血的产物中叶酸的量。此外，应同时测定全血叶酸盐、血清叶酸盐及红细胞比容。
（5）尿亚胺甲酰基谷氨酸测定：组氨酸在体内转化为亚胺甲酰基谷氨酸后，需四氢叶酸进行一碳基团的转移，才能转变为谷氨酸。叶酸缺乏时，亚胺甲酰基谷氨酸的分解代谢受阻而在体内积聚，从尿中大量排出。正常人排泄量的参考值＜3mg/24h，叶酸缺乏时排泄量增加可达1000mg/24h以上。
（6）纸血片标本叶酸检测法：一般进行叶酸测定的血标本是血浆、血清或溶血液，因叶酸不稳定，遇光、热极易分解失活，而且这类标本在采血、血样处理、标本存储及转运的条件上要求均较严格。利用滤纸片法采集指血样进行叶酸检测的方法，是近年来国外在流行病学调查中常用的方法，其具有采血量小、操作简单、经济方便等特点。检测的方法有血红蛋白叶酸测定和放免法检测红细胞叶酸（两方法的相关系数r＝0.79）。
