（一）根据物质溶解度差别进行分离

　　（1）结晶及重结晶方法

　　判断结晶纯度的方法有：

　　a.晶型均一，色泽均匀。

　　b.有一定的熔点和较小的溶距，熔距应在2℃以内。

　　c.TLC或PC分别用三种以上溶剂系统检识，呈现单一圆整斑点。

　　d.HPLC或GC检查呈现单峰。

　　（2）沉淀法

　　水提醇沉法（除去多糖或蛋白质）

　　醇提水沉法（除去树脂或叶绿素）

　　醇提乙醚沉淀或丙酮沉淀法（使皂甙沉淀析出）

　　（3）pH法

　　酸提碱沉法（使生物碱类成分沉淀）

　　碱提酸沉法（使黄酮、蒽醌等成分沉淀）

　　等电点法（使蛋白质沉淀）

　　（4）盐类沉淀法：

　　（二）根据物质在两相溶剂中的分配比不同进行分离

　　1.液-液萃取与分配系数K值

　　2.分离难易与分离因子β

　　3.分配比与pH

　　4.纸色谱

　　5.分配柱色谱

　　（三）根据物质的吸附性差别进行分离

　　1.物理吸附基本规律—相似者易于吸附

　　（1）对极性物质具有较强的亲和能力。故极性强的溶质将被优先吸附。

　　（2）溶剂极性越弱，则吸附剂对溶质的吸附能力越强。溶剂极性增强，则吸附剂对溶质的吸附能力减弱。

　　（3）溶质即使被硅胶、氧化铝吸附，但加入极性较强的溶剂时，又可被后者置换洗脱出来。

　　活性炭因为是非极性吸附剂，故与硅胶、氧化铝相反。

　　2.极性及其强弱判断

　　（1）官能团的极性强弱按下列表达顺序排列：

　　RCOOH ＞ Ar-OH ＞＞、RNHR ＞ RC=O ＞ R-O-R ＞ RH（2）化合物的极性由分子中所含官能团决定。

　　3.吸附色谱法应用

　　（1）硅胶、氧化铝吸附柱色谱过程中，吸附剂的用量一般为样品量的30-60倍。样品极性较小、难以分离者，吸附剂用量可适当提高至样品量的100-200倍。

　　（2）硅胶、氧化铝吸附柱色谱，应尽可能选用极性小的溶剂装柱和溶解样品，以利于样品在吸附剂柱上形成狭窄的原始谱带。

　　（3）洗脱所用溶剂的极性宜逐步增加。

　　（4）为避免发生化学吸附，酸性物质宜用硅胶，碱性物质则宜用氧化铝进行分离。

　　4.聚酰胺吸附色谱法

　　（1）聚酰胺的性质及吸附原理

　　① 形成氢键的基团数目越多，吸附能力越强。

　　② 成键位置对吸附力也有影响。易形成分于内氢键者，其在聚酰胺上的吸附相对减弱。

　　③ 分子中芳香化程度高者，则吸附性增强；反之，则减弱。

　　一般情况下，各种溶剂在聚酸胺柱上的洗脱能力由弱至强，可大致排列成下列顺序；水→甲醇→丙酮→氢氧化钠水溶液→甲酰胺→二甲基甲酰胺→尿素水溶液

　　（2）聚酰胺色谱的应用

　　5.大孔吸附树脂

　　（1）大孔吸附树脂的吸附原理

　　大孔吸附树脂是吸附性和分子筛性原理相结合的分子材料。吸附性是由于范德华引力或产生氢键的结果，分子筛性是由于其本身多孔性结构所决定的。

　　（2）影响吸附的因素

　　大孔吸附树脂本身的性质、溶剂的性质和化合物的性质是影响吸附的3个重要因素。

　　（3）大孔吸附树脂的应用

　　苷与糖类的分离，生物碱的精制，多糖、黄酮、三萜类化合物的分离。

　　（4）洗脱液的选择

　　洗脱液可使用甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等。

　　（四）根据物质分子大小进行分离

　　物质分子大小不同的化合物可用透析法、凝胶过滤法、超滤法、超速离心法等分离。

　　1.凝胶过滤法

　　凝胶的种类：常用的有葡聚糖凝胶（Sepadex-G）以及羟丙基葡聚糖凝胶（Sephadex-LH-20）。

　　2.膜过滤法

　　膜过滤法主要包括渗透、反渗透、超滤、电渗析、透析、液膜技术等。透析法多用于水溶性的大分子和小分子物质的分离，如蛋白质、酶、多糖分离过程中的脱盐。按照孔径大小，可将透析膜分为：微滤膜、超滤膜、反渗透膜、纳米膜。

　　（五）根据物质解离程度不同进行分离